目的:构建靶向磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(glypican-3,GPC3)和NKG2D的双特异性融合蛋白,并初步评价其在体外对肝癌细胞的杀伤功能.方法:通过基因工程技术,将NKG2　D的配体人主要组织相容性复合物Ⅰ类相关蛋白A(MHC　classⅠchain-related　A,MICA)胞外区融合到Fab形式的抗人GPC3抗体GC33的重链末端,构建双特异性融合蛋白(Fab　GC33-MICA,FabGM)表达载体;转染FreeStyleTM　293-F细胞,收集细胞培养上清,经亲和纯化获得FabGM蛋白;利用分子相互作用技术(Fortebio)和流式细胞术检测FabGM的靶向亲和力;细胞实时动态成像分析系统测定FabGM介导的外周血单个核细胞(PBMCs)对高表达GPC3的人肝癌细胞HepG2的杀伤效应,ELISA法检测杀伤过程中PBMCs分泌人干扰素-γ(hIFN-γ)情况.结果:本研究成功地表达并纯化了FabGM,明确FabGM可特异性结合GPC3和NKG2D.经检测FabGM能有效介导PBMCs靶向杀伤HepG2肝癌细胞,诱导PBMCs分泌IFN-γ.结论:双特异性融合蛋白FabGM能够在体外有效介导效应细胞PBMCs杀伤肝癌细胞HepG2,为FabGM成为肝细胞肝癌的潜在靶向治疗药物提供了实验依据.