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蔡珍珍 (蔡珍珍.) | 胡春生 (胡春生.) | 卢育新 (卢育新.) | 程晓晨 (程晓晨.) | 柳伟 (柳伟.) | 张庆林 (张庆林.)

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目的:建立质粒pVAX1-PENK的大规模制备工艺。方法:对大肠杆菌工程菌DH5α-pVAX1-PENK进行补料发酵,利用自行发明的连续碱裂解过程对菌体进行裂解,经超滤浓缩后,用Sepharose 6 Fast Flow层析柱分离DNA与RNA,再经Plasmidselect Xtra层析柱分离超螺旋质粒DNA与开环或线性质粒DNA,最后经Source 15Q层析柱精制质粒DNA。结果:发酵获得质粒pVAX1-PENK的产率为182 mg/L,经碱裂解及层析分离后,最终制备的质粒DNA超螺旋比例大于98%,总回收率为60.5%,纯度(D260nm/D280nm)为1.8~2.0。结论:建立的质...

Keyword:

分离纯化 连续碱裂解 重组质粒pVAX1-PENK 发酵

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  • [ 1 ] 中南大学药学院
  • [ 2 ] 军事医学科学院放射与辐射医学研究所
  • [ 3 ] 北京工业大学生命科学与生物工程学院

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生物技术通讯

Year: 2013

Issue: 06

Volume: 24

Page: 828-832

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