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由DNA甲基转移酶(DNMT1)催化的DNA甲基化在许多生物过程中起重要作用,包括基因转录,基因组印记和细胞分化[1].本文利用特异性酶切法成功开发了一种有效的测定DNMT1的电化学方法.首先,将硫醇修饰的双链DNA(dsDNA)自组装固定在金电极上,随后DNMT1识别dsDNA半甲基化序列并实现完全甲基化,最后通过甲基化特异性限制酶(BSSHⅡ)剪切,未发生完全甲基化的碱基序列将被剪切并移除电极表面.利用差分脉冲伏安法(DPV)分别测定剪切前后的亚甲基蓝(MB)还原电流.在最佳优化条件下,该方法线性范围为0.5 nM～50 nM,检测限为0.5 nM.这种方法可以简单有效地检测DNA甲基化和DNMT1活性,在DNA甲基化快速检测和基因毒理分析方面具有一定的实际意义.
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化学研究与应用
ISSN： 1004-1656
Year： 2019
Issue： 6
Volume： 31
Page： 1079-1085
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