目的　通过基因敲除技术缺失毕赤酵母编码的羧肽酶Y(carboxypeptidase　Y,CPY)基因cpy,观察其对毕赤酵母生长和外源蛋白表达的影响.方法　通过PCR方法扩增出内部含有潮霉素B抗性基因的cpy同源序列；通过电转法将同源序列转入GS115-EH感受态细胞中,并用潮霉素B筛选出阳性克隆.用平板显色法测定阳性克隆菌的羧肽酶活性,同时用PCR法鉴定阳性克隆菌的cpy基因是否缺失.对cpy基因缺失的GS115-EH△cpy菌,分别用YPD和BMGY-BMMY培养研究其生长特性；用BMMY培养基进行甲醇诱导表达外源蛋白,观察其蛋白表达的特性.结果　GS115-EH△cpy的羧肽酶基因cpy被成功敲除,羧肽酶活性丧失.YPD培养条件下,GS115-EH△cpy生长后期的D600明显低于GS115-EH,而用BMMY诱导培养基,GS115-EH△cpy的生长明显改善,但仍然低于对照菌.蛋白电泳结果显示甲醇诱导GS115-EH△cpy的蛋白表达量也低于对照菌.结论　GS115-EH△cpy的cpy基因被成功敲除,在YPD培养条件下,其生长低于对照菌,在BMMY培养条件下,其生长明显改善,但仍然较对照菌差,而且其外源蛋白的表达也低于对照菌.